Если его результат положительный, то этот результат верный. «Если экспресс-тест показал положительный результат, а ПЦР-тест — отрицательный, такое может быть, потому что вирусы не сидят и не ждут. О положительном результате ПЦР. Положительный результат ПЦР-диагностики, с большой долей вероятности позволяет говорить, что пациент инфицирован коронавирусом – SARS-Cov-2. Отрицательный и ложноотрицательный результат. ПЦР (полимеразная цепная реакция) – достижение молекулярной биологии, одна из главных методик клинической лабораторной диагностики конца 20-го и начала 21-го веков, приносящая огромную пользу в различных областях медицинской науки. Случаи, когда ПЦР-тест на коронавирус оказывается положительным в течение месяца и даже более, как правило, встречаются в стационарах у пациентов, которые болеют тяжелее.
Диагностика COVID-19: обзор основных методов
Чтобы полимераза могла сесть на одиночную цепь ДНК и начать свое дело, ей нужна затравка - это уже готовый маленький кусочек второй цепи, сидящий на первой. Его еще называют праймер. В клетках его делает специальный фермент праймаза, да и вообще там на самом деле жесть все как сложно, но об этом в другой раз. Адская схема репликации. Все, что надо понять - была одна двойная спираль, а стали две, и помогли им в этом, помимо все прочего, праймеры и полимераза. Так или иначе, в итоге вся ДНК в клетке удваивается, и вот теперь клетка может спокойно делиться. Прочитали до сюда? Вот теперь можем переходить непосредственно к ПЦР. Ученые уже десятилетия изучают свойства ДНК. Выделяют из живых организмов, синтезируют искусственно... Потому что когда его мало, то труднее ставить эксперименты - проще запороть, загрязнить чем-то чужеродным и т.
И тогда в далеком 1983м один любящий галлюциногены ученый Кэри Муллис решил использовать для этого то, что давно уже придумала природа - репликацию, только искусственную, в пробирке. Нобелевку по химии за это получил, кстати... За основу взяли все основное, что есть в "натуральной" репликации - собственно ДНК, полимеразу, свободные буквы-нуклеотиды, чтобы ей было что вставлять в новую цепь, и праймеры - затравку, которая покажет полимеразе, откуда ей начать свое грязное дело. Путем долгих манипуляций и экспериментов выяснилось, что оптимальнее всего смешать все это и поставить на определенный температурный режим, где каждый этап реакции будет происходить на своей заданной температуре. Этапа всего три: 1 Денатурация. При 95 градусах двойная спираль ДНК распадается на две нити разрушаются те самые слабые водородные связи между комплементарными нуклеотидами. При 40-60 градусах в зависимости от ряда факторов маленькие затравки находят комплементарный участок на одиночной цепи и садятся на него. При 72 градусах полимераза садится на затравку и начинает достраивать новую цепь, пользуясь старой как шаблоном. Откуда именно 72 градуса - очень интересная история о пользе фундаментальной науки, как-нибудь в другой раз.
Не обнаружен в исследуемом биоматериале, которым чаще всего является мазок из рото- или носоглотки. Почему так происходит? Потому что вирус совсем недолго находится на слизистой верхних дыхательных путей, спускаясь в бронхи и лёгкие — мишень поражения. Поэтому лучше искать его ниже — в мокроте, выделяемой при кашле, и смывах из нижних дыхательных путей бронхоальвеолярный лаваж. Участки генома вируса способны связываться с гемом, нарушая функцию гемоглобина в эритроцитах. Это мешает транспортировке кислорода клетками крови и именно гипоксия недостаток кислорода негативно влияет на лёгкие. Влияние вируса на кровь подталкивает к мысли, что именно в ней мы можем найти SARS-Cov-2 в тяжёлых клинических случаях, хотя не обнаруживаем его на слизистых верхних дыхательных путей. Мы должны научиться выделять вирус из крови. Описана даже кишечная форма короноавируса, проявившаяся тошнотой, рвотой, диареей. И искать его тогда следует в кишечнике, диарейных массах и анальных мазках. Это, кстати, дополнительный фактор, свидетельствующий о том, что вирус передаётся не только воздушно-капельным путём, но и фекально-оральным. Диагностика по антителам Если ПЦР- это прямой метод обнаружения вируса, то выявление в крови антител к нему — это косвенное свидетельство контакта человека с инфекционным агентом. Иммунная система в ответ попадание патогена в организм вырабатывает защитные антитела.
Транспортировка, если она необходима, должна проводиться в специальных термоконтейнерах или термосах с соблюдением всех правил хранения и перевозки биоматериалов. Выделение ДНК из образца. Способ выделения зависит от вида определяемого микроорганизма и от вида биологического образца. Если, например, анализируется соскоб эпителиальных клеток, используется так называемый метод твердофазной сорбции, заключающийся в добавлении в образец специального вещества, концентрации ДНК на сорбенте и его многократной отмывке буферным раствором. Проведение ПЦР. Некоторое количество образца из биологической пробы переносится в специальную микроцентрифужную пробирку. Туда же добавляется амплификационная смесь, имеющая сложный состав, в объеме 25 мл. Пробирки устанавливают в программируемый термостат, и автоматическом режиме проводится амплификация. Время ее проведения зависит от заданной программы и составляет 2—3 часа. Одновременно с опытными пробами проводятся контрольные — положительные, включающие в себя контрольный препарат ДНК исследуемого возбудителя, и отрицательные, не содержащие исследуемую ДНК. Количество циклов амплификации варьирует от 30 до 40, более 40 циклов проводить не рекомендуется, так как это способствует увеличению количества неспецифических продуктов в пробе. Регистрация результатов. Фрагмент ДНК, характерный для возбудителя инфекции, выделяют методом электрофореза в присутствии специального вещества — бромистого этидия. Его соединение с фрагментами ДНК дает светящиеся полосы при облучении ультрафиолетовым излучением. Образец помещают в камеру для электрофореза и в течение 35—40 минут проводят разделение продуктов амплификации. После этого образец просматривают в ультрафиолетовом свете — наличие оранжевой светящейся полосы свидетельствует о положительном результате. Интерпретация результатов исследования. Результат ПЦР-диагностики может быть либо положительным, либо отрицательным. Положительный результат говорит о том, что в организме человека обнаружены следы инфекции, причем именно в данный момент времени. Количественный результат ПЦР-анализа оценить может только врач, они индивидуальны для разных типов инфекций. На основании количественного результата можно сделать вывод о степени активности заболевания и определить характер лечения. Цены на ПЦР-диагностику Цена ПЦР-диагностики зависит от того, на какую конкретно инфекцию пациент планирует проверяться, от вида анализируемого материала, методики тестирования — качественной или количественной. Цена за определение одной инфекции составляет от 200 до 800 рублей в разных клиниках. Кроме того, к стоимости анализа добавится и плата за забор биоматериала — около 400 рублей. Средняя стоимость ПЦР-диагностики разных видов приведена в таблице 1. Таблица 1.
Расставить все по полочкам мы попросили заведующего лабораторией редактирования генома Национального медицинского исследовательского центра им. Фото: АГН «Москва» — Денис Владимирович, сориентируйте, пожалуйста, наших читателей в многообразии имеющихся диагностических тестов. Но суть теста от этого не меняется, это обычная ДНК-диагностика. В подавляющем большинстве случаев она основана на методе ПЦР — полимеразной цепной реакции. Это самый надежный метод ДНК-диагностики, золотой стандарт определения вирусных инфекций. В среднем исследование занимает 3-4 часа. Но поскольку надо доставить образец в лабораторию, зарегистрировать его и пр. Как правило лаборатории заявляют, что выполнят тест от 8 часов до 2-3 дней. Если некоторые лаборатории заявляют, что «Результат будет сегодня», а другие обещают это только через 3 дня, это связано не с продолжительностью собственно анализа, а с логистикой обработки биоматериала. Более-менее все они одинаковы по своей чувствительности и специфичности. Хотя самые первые тесты, рекомендованные к применению в феврале, отличались немного пониженной чувствительностью. Кроме того, есть и фактор «врача»: в одном случае у пациента могли взять побольше вируса и его система «увидела», в другом — в пробирку попало меньше вирусных частиц, и ответ был ложно-отрицательным.
Всегда ли положительный тест на COVID-19 означает, что пациент заразен?
ПЦР положительный: что это значит. Полимеразная цепная реакция почти для каждого из нас стала обыденностью, даже если этот каждый никогда и слов таких не слышал. метод применяется в медицине, биологии, ветеринарии, криминалистике, санитарной службе и других отраслях деятельности человека. Что делать, если пришел положительный результат анализа COVID-19. ПЦР-тест даст более точный результат, если врач возьмет у пациента мазок с первого по пятый день заболевания. ПЦР тестирование. Полимеразная цепная реакция — это технология, позволяющая выделить из двойной спирали ДНК участок с конкретным геном, размножить его и изучить.
Может ли ПЦР-тест на COVID-19 показать положительный результат при простуде
Анализ делают 1,5—2 суток. Результат оценивается либо положительно, когда бактерия или вирус выявляются в исследуемом образце, либо отрицательно, что означает отсутствие инфекции в организме. Кроме того, ПЦР дает информацию о количестве возбудителя, что важно при выборе схемы лечения. Количественные результаты оцениваются непосредственно врачом, поскольку этот показатель индивидуален.
Показания Анализ ПЦР на ЗППП назначают для дифференциальной диагностики при появлении следующих симптомов: боль внизу живота, в том числе во время полового акта; специфические выделения из влагалища: желтые, серые, зеленые, гнойные, пенистые, водянистые, с неприятным запахом и т. ИППП могут протекать бессимптомно, особенно у мужчин. Но даже при бессимптомном течении их нужно лечить, поскольку они провоцируют возникновение тяжелых осложнений. Показанием к молекулярной диагностике методом ПЦР в урологии и гинекологии является: воспаление шейки матки, простаты, уретры, органов малого таза; бесплодие у мужчин и женщин; эректильные нарушения. Анализ на скрытые инфекции требуется после незащищенного полового акта с постоянным при наличии симптомов ЗППП или незнакомым партнером, на этапе подготовки к беременности , а также по окончанию лечения половых инфекций. Вирусы, как ВПЧ или генитальный герпес не поддаются лечению. Бактериальные и грибковые инфекции излечимы. Чтобы обнаружить скрытое присутствие вируса герпеса в крови, необходимо сдать анализ на антитела IgG.
Противопоказания Соскоб ПЦР не берут во время месячных. Альтернативой может стать анализ крови. Также исследование не проводят во время местной или общей антибактериальной терапии.
Смесь полимераз берётся в отношении 50:1 или даже меньше 100:1, где Taq-полимеразы берётся в 25—100 раз больше, чем Pfu-полимеразы. RAPD Random Amplification of Polymorphic DNA [en] , ПЦР со случайной амплификацией полиморфной ДНК — используется тогда, когда нужно различить близкие по генетической последовательности организмы, например, разные сорта культурных растений, породы собак или близкородственные микроорганизмы. В этом методе обычно используют один праймер небольшого размера около 10 п. Этот праймер будет частично комплементарен случайным участкам ДНК исследуемых организмов. Подбирая условия длину праймера, его состав, температуру и пр. Групп-специфическая ПЦР group-specific PCR — ПЦР для родственных последовательностей внутри одного или между разными видами с использованием консервативных праймеров к этим последовательностям. Например, подбор универсальных праймеров к рибосомальным генам 18S и 26S для амплификации видоспецифического межгенного спейсера: последовательность генов 18S и 26S консервативна между видами, поэтому ПЦР между этими генами будет проходить для всех исследуемых видов. Противоположностью этому методу является уникальная ПЦР unique PCR , где задача состоит в подборе праймеров для амплификации только одной последовательности изо всех родственных. ПЦР с использованием горячего старта [en] hot start PCR — модификация ПЦР с использованием ДНК-полимеразы, в которой полимеразная активность блокируется при комнатной температуре антителами или имитирующими антитела небольшими молекулами типа Affibody [en] , то есть в момент постановки реакции до первой денатурации в ПЦР. Удобен при создании библиотеки вариантов в случае, когда фрагмент ДНК слишком велик для химического синтеза. UPSR [21] — метод ПЦР, применяемый, например, при работе с древней ДНК, когда даже незначительная контаминация смеси реактивов нежелательными последовательностями приводит к снижению выхода целевого продукта. Если нуклеотидная последовательность матрицы известна частично или неизвестна вовсе, можно использовать вырожденные праймеры, последовательность которых содержит вырожденные позиции, в которых могут располагаться любые основания.
Кроме того, есть и фактор «врача»: в одном случае у пациента могли взять побольше вируса и его система «увидела», в другом — в пробирку попало меньше вирусных частиц, и ответ был ложно-отрицательным. Он включает несколько этапов. Первый этап -высвобождение нуклеиновой кислоты из вируса занимает минут 30-40 , потом идет этап обратной транскрипции — превращение РНК в ДНК и ПЦР-амплификации 1,5 часа. Каждый набор реагентов, как правило, поставляется в комплекте для анализа 96-ти образцов. Поэтому цифры поставленных тест-систем иногда плавают: кто-то считает комплектами, кто-то единицами тестов. Более корректно считать в единицах. А сегодня нам сообщают, что Россия поставляет тест-системы в 30 стран мира. У нас действительно хватает тестов на всю страну? У нас исторически хорошие мощности по производству такого рода реагентов. Если в Москве мы обнаруживали положительный образец, должны были контрольную копию доставить в Новосибирск. Пока анализы доставлялись туда, потом обратно, проходило как раз несколько суток. На сегодня отправка второго образца анализа из клиники идет для повторного подтверждения не в Новосибирск, а в московский региональный центр.
Сколько можно болеть: почему даже спустя месяц ПЦР-тест на ковид остается положительным
| ПЦР ДИАГНОСТИКА. Что это такое? | ПЦР расшифровывается как полимеразная цепная реакция. Данная реакция обеспечивает многократное воспроизводство определённых участков ДНК. Сделать ПЦР-диагностику в Москве Вы можете в лаборатории АО «Семейный доктор». |
| Ложноположительный ПЦР: Почему так бывает? | ПЦР-тест даст более точный результат, если врач возьмет у пациента мазок с первого по пятый день заболевания. |
Что такое ПЦР? О методе полимеразной цепной реакции
Если результат положительный — его повторяют, и только в случае двойного положительного результата пациенту сообщают о болезни. Анна Солдатова.
В 1983 году его открыл американский ученый Кэри Мюллис, за что впоследствии и получил Нобелевскую премию. Изначально метод использовался в основном для научных целей, но затем, разглядев перспективность и эффективность, его стали продвигать в практическую медицину. Что представляет собой ПЦР Анализ абсолютно специфичен. При правильном выполнении он не может дать ложноположительный результат, поэтому его используют для диагностики инфекционных и наследственных заболеваний, для установления отцовства, клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов. В основу положена возможность значительно увеличивать малые концентрации определенных фрагментов ДНК. Для исследования потребуется небольшое количество биоматериала, например крови, слюны или мазок из половых органов. Анализ проводят в искусственных условиях in vitro. ДНК содержит генетическую информацию любого живого организма.
Молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Их последовательность уникальна для каждого организма, как отпечаток пальца или скан сетчатки глаза. Поскольку для каждого возбудителя зарегистрированы типичные укороченные последовательности нуклеотидов, то они хранятся в лабораториях в виде праймеров. Их в свою очередь присоединяют к ДНК возбудителя в пробе, и они многократно воспроизводят свои дубли под действием катализаторов.
Аппаратная база. Бедняга Муллис и его последователи сначала использовали тупо три водяных бани с разной температурой, вручную перемещая из одной в другую ценные пробирки с реакцией. Мы на практике в универе почему-то делали так же... Но как только мир понял, что ПЦР - это офигенно, сразу появились лабораторные приборы, которые этот процесс автоматизируют. Фактически это просто нагревательный блок, способный очень точно держать температуру в течение заданного времени и быстро его менять.
Сейчас их на рынке пруд пруди, на любой вкус и цвет, чуть ли не кофе умеют готовить. Но как нам это все помогает при анализах на вирус? Вот такой милаха прогонит ПЦР за полчасика Медицинское применение. Причем ее может быть изначально очень мало, но цепной характер реакции позволит нам ее приумножить. Но если изначально целевой ДНК в пробе нет, то и реакция не пройдет. Добавляем полимеразу и праймеры, которые сядут именно и только на определенное место в ДНК какого-то интересующего нас патогена ДНК патогена ведь сильно отличается от нашей. Запускаем реакцию и смотрим, прошла она или нет! Если прошла - значит, пациент был заражен этим патогеном, а на нет и суда нет. Получился очень точный, быстрый и относительно дешевый метод выявления патогенов - прикиньте, раньше пока анализ на какую-нибудь бактерию высеешь на питательную среду, дождешься, чтобы оно подросло, определишь, что выросло - несколько дней пройдет.
А тут готовый результат за пару часов! Осталось только подобрать такие праймеры, чтобы они садились "отжигались" действительно только на ДНК патогена, а не на человеческую ДНК. Этот трудоемкий процесс и называется созданием тест-системы - наверняка слышали такое словосочетание в новостях! Этим занимаются, как правило, крупные компании, вкладывающие в этот процесс большие деньги и время. Но тут что хорошо - один раз подобрал такие праймеры - и все, дальше любой лаборант с минимальным опытом сможет провести сам анализ. Дальнейшее развитие ПЦР пошло по пути ответа на вопрос "прошла реакция или нет?
Какую информацию дает тест на антитела Тест на антитела проводят иммуноферментным методом по анализу крови из вены тоже в лаборатории Государственного научного центра дерматовенерологии. При этом определяют не наличие самого вируса, а наличие антител к нему. Во время теста подсчитывается их количество для установления стадии заболевания. Возможно проведение теста на один из видов антител или оба второй вариант более информативный, поэтому он предпочтительнее. Первый тип антител, IgM, выделяется в организме с первых дней развития болезни, что происходит на 2-7 день после заражения. Они остаются в крови около 1-2 недель, а после выздоровления исчезают. Что означает положительный результат на антитела IgM? Вариантов может быть несколько, в зависимости от подсчитанного количества: если иммуноглобулинов данного типа немного, то COVID-19 находится на начальном этапе развития; если количество зашкаливает, значит сейчас острая фаза. В это время человек все еще является разносчиком инфекции, даже если у него нет никаких симптомов; присутствие IgM в небольшом количестве в сочетании с IgG указывает на завершение болезни. Иммуноглобулин типа G производится в острой стадии и остается в крови после выздоровления, обеспечивая иммунитет длительное время. Если тест показал наличие антител к коронавирусу типа IgG, значит у вас уже есть иммунитет к данному заболеванию и вы не представляете опасности для окружающих. Небольшое количество иммуноглобулинов свидетельствует о том, что вы переболели недавно.
Анализ ПЦР 12 инфекций
Его берут из носовой пазухи — места наибольшей концентрации вируса. В случае ПЦР биоматериал берут дважды, через нос и через рот, смешивают с физраствором и отправляют в лабораторию. Все исследование занимает около трех часов, рассказывает технолог подразделения молекулярно-генетических исследований лаборатории Маргарита Абрамова.
Если концентрация увеличена в 3-4 раза от нормы, это означает, что начались осложнения. При этом анализе учитывается возраст пациента, поскольку после 50 лет уровень D-димера повышается. Хронические заболевания и беременность также влияют на показатель. Специфическая Среди таких методов диагностики чаще всего используются два вида. Экспресс-тесты Дают возможность узнать, выработался ли у человека иммунитет к вирусу. Для этого проводятся исследования на наличие двух антител: G и M. Если результат такого иммунохроматографического ИХГ теста положительный, это свидетельствует о том, что заболевание в организме протекает уже больше недели.
ИХГ анализ помогает быстро выявить даже бессимптомный коронавирус. Кроме того, можно оценить уровень иммунной защиты организма. Отличие экспресс-тестов от обыкновенных не только в быстром результате, но и в месте проведения. Делаются такие не в специальной лаборатории, а локально. Берется кровь из пальца либо из вены. Это очень удобно, если необходимо протестировать много людей вне медицинского учреждения.
Полимеразная цепная реакция ПЦР, PCR — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний. В 1983 году его открыл американский ученый Кэри Мюллис, за что впоследствии и получил Нобелевскую премию. Изначально метод использовался в основном для научных целей, но затем, разглядев перспективность и эффективность, его стали продвигать в практическую медицину. Что представляет собой ПЦР Анализ абсолютно специфичен. При правильном выполнении он не может дать ложноположительный результат, поэтому его используют для диагностики инфекционных и наследственных заболеваний, для установления отцовства, клонирования генов, введения мутаций, выделения новых генов. В основу положена возможность значительно увеличивать малые концентрации определенных фрагментов ДНК. Для исследования потребуется небольшое количество биоматериала, например крови, слюны или мазок из половых органов. Анализ проводят в искусственных условиях in vitro. ДНК содержит генетическую информацию любого живого организма. Молекула состоит из двух цепочек, сплетающихся в единую спираль. Их последовательность уникальна для каждого организма, как отпечаток пальца или скан сетчатки глаза. Поскольку для каждого возбудителя зарегистрированы типичные укороченные последовательности нуклеотидов, то они хранятся в лабораториях в виде праймеров.
Чувствительность ПЦР-анализа составляет 10-1000 клеток в исследуемом образце к примеру, чувствительность иммунологических и микроскопических тестов - всего 103-105 клеток. Методика позволяет выявлять несколько возбудителей из одной биологической пробы. Полное исследование проводится за 4-4,5 часа, реже — несколько дольше. Примером доклинической диагностики будет обследование в инкубационный период с момента заражения до возникновения жалоб больного , а также латентная инфекция когда симптомов нет совсем, а есть только лабораторные данные — ПЦР, к примеру. Одним из важных моментов ПЦР-диагностики является проведение ПЦР в архивном материале или биологических остатках, что важно для идентификации личности или отцовства. В настоящее время ПЦР-диагностика подвергается существенному развитию. Происходит совершенствование самого метода, вновь и вновь появляются новые разновидности ПЦР, на медицинский рынок поступают новые тест-системы для данной реакции. Благодаря этому стоимость ПЦР-исследований с каждым годом становится доступнее для широкого круга пациентов. В ходе исследования копируется только тот участок, который подходит под заданные условия, и только в ситуации присутствия его в исследуемой пробе. Например, материал для исследования, в котором предполагается наличие фрагментов ДНК или РНК возбудителя слюна, кровь, моча, выделения из половых органов , помещается в специальный реактор амплификатор. Далее к нему добавляются специфические ферменты, которые связываются с ДНК или РНК патогена, и происходит синтез ее копии. Это копирование идет в несколько этапов по типу «цепной реакции», и в конечном итоге из одной копии генетического материала могут образоваться сотни и тысячи копий. Затем идет анализ и сравнение результата с имеющейся базой данных о строении различных возбудителей.
Диагностика методом ПЦР: современный подход выявления инфекционных и генетических заболеваний
О положительном результате ПЦР. Положительный результат ПЦР-диагностики, с большой долей вероятности позволяет говорить, что пациент инфицирован коронавирусом – SARS-Cov-2. Отрицательный и ложноотрицательный результат. Таким образом, при простуде ПЦР-тест не может дать положительный результат на коронавирус. ПЦР-тестирование рекомендовано для диагностирования COVID-19 ВОЗ и Центром по контролю и профилактике заболеваний США. полимеразная цепная реакция. О положительном результате ПЦР. Положительный результат ПЦР-диагностики, с большой долей вероятности позволяет говорить, что пациент инфицирован коронавирусом – SARS-Cov-2. Отрицательный и ложноотрицательный результат. Анализ — полимеразная цепная реакция имеет аббревиатуру — ПЦР. — Ложноположительный результат — это когда пациент не инфицирован коронавирусом, но лаборатория выдала положительный результат теста на SARS-CoV-2 методом ПЦР.
Анализ ПЦР 12 инфекций
Положительный ПЦР означает только то, что Вы заразны для окружающих и выделяете вирус. Результат ПЦР-анализа либо положительный, либо отрицательный. Положительный указывает на то, что у человека присутствуют фрагменты ДНК возбудителя заболевания, то есть, что человек заражен и ему необходимо лечение. Если человек сдал тест на коронавирус, а результат оказался положительным, то это означает, что он является носителем вируса, в данный момент болеет COVID-19 или уже вылечился, но в его организме сохранились антитела. Диагностика коронавируса (ПЦР). ПЦР — это полимеразная цепная реакция. Полимеразная цепная реакция (ПЦР, PCR) — это точный метод лабораторной диагностики, который используют для выявления возбудителей инфекционных заболеваний.